Countstar細(xì)胞計(jì)數(shù)儀操作手冊(cè)

計(jì)數(shù)儀的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 和 細(xì)胞計(jì)數(shù)和活率檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作程序

一、 啟動(dòng)Cedex XS 系統(tǒng)

1. 打開(kāi)計(jì)數(shù)儀：按下計(jì)數(shù)儀上的ON/OFF按鈕，按鈕亮起藍(lán)色光表示儀器已打開(kāi)；

2. 打開(kāi)Cedex XS 控制軟件：

① 打開(kāi)配套電腦，進(jìn)入Windows操作系統(tǒng)；

② 雙擊桌面上的Cedex XS 圖標(biāo)，進(jìn)入Cedex XS 控制中心；

3. 調(diào)節(jié)白平衡：安裝Cedex XS系統(tǒng)或移動(dòng)系統(tǒng)后必須調(diào)節(jié)白平衡。 ① 把樣品板支架拉出；

② 點(diǎn)擊Cedex XS 控制中心中的HWM鍵，打開(kāi)硬件管理對(duì)話框；

③ 點(diǎn)擊WHITE BALANCE鍵進(jìn)行調(diào)節(jié)，結(jié)果將自動(dòng)保存；

④ 調(diào)節(jié)完畢后關(guān)閉對(duì)話框。

二、 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活性測(cè)定

1. 樣品制備

① 用培養(yǎng)基或PBS將樣品稀釋至細(xì)胞數(shù)不高于5×106/ml；

② 使用0.2%臺(tái)盼藍(lán)染色（一般為10μl、1：1）：臺(tái)盼藍(lán)對(duì)血清蛋白親和力更強(qiáng)，若大量血清蛋白導(dǎo)致圖像背景過(guò)暗，可以將樣品離心，用無(wú)蛋白培養(yǎng)基或生理鹽水懸浮細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)； ③ 將細(xì)胞懸液充分混勻；

④ 用移液槍取細(xì)胞懸液加入樣品板，每槽10μl；可以一次測(cè)定八槽，也可測(cè)定單槽。

2. 進(jìn)樣：樣品板有八個(gè)槽，一次可測(cè)定四個(gè)樣品槽。

① 拉出樣品板支架；

② 加有樣品方向朝里，將樣品板放上支架；

③ 將支架推入計(jì)數(shù)儀，有少許卡扣感表示已就位：樣品槽位置指示燈表示樣品測(cè)定進(jìn)程。

三、 軟件設(shè)置：

1. 打開(kāi)測(cè)定界面：在Cedex XS 控制中心點(diǎn)擊MEASURE鍵，進(jìn)入測(cè)定界面；

2. 設(shè)置樣品參數(shù)：

① 在樣品參數(shù)欄輸入樣品名（Reactor ID），可在下拉欄選擇或手動(dòng)輸入，zui多可輸入21個(gè)字符；

② 輸入樣品編號(hào)（Sample ID），zui多21個(gè)字符；若樣品名已存在，軟件將自動(dòng)延續(xù)樣品編號(hào)，也可手動(dòng)重新輸入編號(hào)；

③ 軟件將自動(dòng)記錄日期和時(shí)間，表明樣品測(cè)定的實(shí)際時(shí)間；

④ 點(diǎn)擊MI×鍵，出現(xiàn)進(jìn)樣體積對(duì)話框；

⑤ 輸入?yún)?shù)：樣品量（Sample Volume）、臺(tái)盼藍(lán)用量（Dye Volume）、稀釋劑用量（Diluent Volume）；

⑥ 系統(tǒng)將自動(dòng)計(jì)算稀釋比例等，可以手動(dòng)輸入注釋（Comments）。

3. 設(shè)置測(cè)定與分析參數(shù)：

① 在分析參數(shù)欄選擇需要的精度水平（Precision）：精度水平表示單次測(cè)定樣品數(shù)，zui多8個(gè)；

② 選擇細(xì)胞類型，默認(rèn)的細(xì)胞類型有：標(biāo)準(zhǔn)大小細(xì)胞直徑約12-14μm；可識(shí)別對(duì)象；小細(xì)胞直徑約8μm；

③ 系統(tǒng)自動(dòng)添加系統(tǒng)名和測(cè)定時(shí)間。

四、 開(kāi)始測(cè)定

① 點(diǎn)擊START MEASUREMENT鍵；

② 測(cè)定多個(gè)樣品時(shí)，在彈出對(duì)話框后將樣品板支架推進(jìn)一格，點(diǎn)擊確定自動(dòng)開(kāi)始測(cè)定程序； ③ 重復(fù)上一步驟測(cè)定其他樣品；

④ 若測(cè)定樣品多于四個(gè)，可將支架抽出后樣品板調(diào)轉(zhuǎn)方向重新插入進(jìn)行上述測(cè)定程序； ⑤ 全部測(cè)定結(jié)束后關(guān)閉對(duì)話框。

五、 計(jì)數(shù)結(jié)果

1. 在測(cè)定界面獲得結(jié)果

測(cè)定程序完成后，結(jié)果在測(cè)定界面的數(shù)據(jù)欄（Result Data）顯示，數(shù)據(jù)欄有兩個(gè)表格：*個(gè)表格顯示總細(xì)胞數(shù)，第二個(gè)表格顯示單次測(cè)定中每個(gè)樣品室的測(cè)定結(jié)果。

兩個(gè)表中分別列出以下參數(shù)：

Viable Cell Conc.: 活細(xì)胞濃度 [×105/mL] Total Cell Conc.: 總細(xì)胞濃度 [×105/mL] Viability (%): 細(xì)胞總數(shù)中活細(xì)胞的百分比 Total Cell Count: 測(cè)定總細(xì)胞數(shù) Avg Compactness: 活細(xì)胞與理想狀態(tài)細(xì)胞形狀的平均變異程度（1表示細(xì)胞形狀均一） Avg Diameter: 測(cè)定活細(xì)胞平均直徑 [μm] Aggregate Rate (%):成團(tuán)細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的比值 Dead Cell Conc.: 死細(xì)胞濃度 [×105/mL]

Viable Cell Count: 測(cè)定活細(xì)胞數(shù) Dead Cell Count: 測(cè)定死細(xì)胞數(shù) Total Object Count: 全部測(cè)定數(shù) Total Object Conc.: 總濃度 [×105/mL] Avg Object Diameter: 測(cè)定總?cè)后w平均直徑 [μm] Avg Object Compactness: 所有測(cè)定群體與理想狀態(tài)細(xì)胞形狀的平均變異程度。

在單個(gè)樣品結(jié)果表中，會(huì)有三項(xiàng)列在表頭：

 Image No.: 圖像編號(hào)l

 Valid: 表示圖像質(zhì)量是否能夠達(dá)到分析要求l

 Excluded: 復(fù)選框以排除或包括該樣品在總結(jié)果表中的顯示l

2. 在柱形圖中看結(jié)果：此結(jié)果不包括已經(jīng)由上述復(fù)選框選擇排除的計(jì)數(shù)結(jié)果 ① 在測(cè)定界面點(diǎn)擊HISTOGRAMS鍵，打開(kāi)柱形圖對(duì)話框；

② 可選擇以下項(xiàng)目：

成團(tuán)細(xì)胞柱形圖 細(xì)胞直徑柱形圖 細(xì)胞形狀均一度柱形圖 總?cè)褐睆街螆D

六、 查看圖像

單副圖像：在測(cè)定界面的右側(cè)顯示的是選定的單個(gè)樣品測(cè)定結(jié)果所對(duì)應(yīng)的圖像；

多幅圖像：在圖像顯示區(qū)點(diǎn)擊VIEW IMAGES鍵出現(xiàn)圖像列表，可顯示單次測(cè)定的多個(gè)樣品。

1. 在圖像框查看圖像

圖像框提供放大圖像，系統(tǒng)自動(dòng)分析活細(xì)胞與死細(xì)胞，并用綠色圈和紅色圈分別標(biāo)出，還可以使用下列功能：

 雙擊圖像可打開(kāi)大圖，調(diào)節(jié)對(duì)比、亮度和焦距；l

 顯示或隱藏細(xì)胞的圈標(biāo)記；l

 瀏覽前后樣品的圖像；l

 按住左鍵圈定可將選定圖像放大或自定義尺寸，右鍵點(diǎn)擊圖像進(jìn)行保存或復(fù)制。l

七、 系統(tǒng)優(yōu)化：調(diào)節(jié)白平衡

若圖像亮度不均衡，則需調(diào)節(jié)白平衡，影響圖像亮度的調(diào)節(jié)。

① 把載物支架拉出；

② 點(diǎn)擊Cedex XS 控制中心中的HWM鍵，打開(kāi)硬件管理對(duì)話框；

③ 點(diǎn)擊WHITE BALANCE鍵進(jìn)行調(diào)節(jié)，結(jié)果將自動(dòng)保存；

④ 調(diào)節(jié)完畢后關(guān)閉對(duì)話框

八、 結(jié)果列表

1. 點(diǎn)擊Cedex XS 控制中心中的LIST鍵，或在Measurements菜單中選擇Measurement List，可選擇以下功能：

查找結(jié)果 瀏覽總體的測(cè)定數(shù)據(jù) 刪除結(jié)果 打印報(bào)告 結(jié)果輸出保存為文件 開(kāi)始新測(cè)定 查看測(cè)定過(guò)程 重新測(cè)定

2. 查找結(jié)果可以通過(guò)以下方式：選定后點(diǎn)擊FIND鍵

樣品處理時(shí)間 測(cè)定時(shí)間 樣品名 樣品編號(hào) 系統(tǒng)名 存檔數(shù)據(jù)/全部數(shù)據(jù) 數(shù)據(jù)組 細(xì)胞類型

九、 關(guān)機(jī)

順序?yàn)椋篊edex XS 控制中心（軟件）→配套電腦→計(jì)數(shù)儀